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Meilunbio活死細菌染色試劑盒(可應用流式分析)
LIVE/DEADBacterial Viability and Counting Kit
for flow cytometry
產(chǎn)品貨號：MA0390 100T [￥4500.00]
http://www.byyzgj.com/goods.php?id=22922
美侖活死細菌染色試劑盒（LIVE/DEAD Bacterial Viability and Counting Kit, for flow cytometry）可以通過流式細胞儀有效的區(qū)分活、死細菌并實現(xiàn)定量檢測；而且對各類細菌的混合物也可以實現(xiàn)定量分析檢測。該試劑盒采用兩種核酸染料來進行細菌活力測定：綠色熒光染料meilungreen（美侖自主研發(fā)，功能等同于SYTO 9）以及紅色熒光染料PI（碘化丙啶），并通過標準微球精準測量樣品體積。用適當比例的meilungreen與PI混合物染色時，細胞膜完好的細菌發(fā)出明亮的綠色熒光，而細胞膜受損的細菌則表現(xiàn)出綠色熒光明顯減弱，同時發(fā)出較強的紅色熒光。細胞類型和革蘭氏特征會影響死細菌產(chǎn)生紅色熒光的強度。meilungreen與PI染料在大部分流式細胞儀中都是由488nm激光器實現(xiàn)有效激發(fā)的，各自的核酸復合物熒光信號可分別在綠色通道和紅色通道中檢測到，并且?guī)缀鯖]有背景熒光。
標準微球懸浮液作為樣品體積的參考標準，尺寸和熒光經(jīng)過仔細篩選，以確保微球在流式細胞檢測中熒光--側(cè)向散射圖中可以明顯的區(qū)別于被染色的細菌。用meilungreen和PI對細菌培養(yǎng)液進行簡單染色，在流式細胞儀上分析樣本前加入固定數(shù)量的微球?；罹退谰约拔⑶蛟跓晒?-側(cè)向散射圖中很容易區(qū)分，然后通過細胞圖中細菌事件數(shù)與微球事件數(shù)的比值來計算死菌和活菌的濃度（見下方圖1）。
細菌活力標準：
細菌的生存能力不能用簡單的生理或者形態(tài)參數(shù)來定義，因此單一的生存能力測定可能會在實驗中引入一定的偏差。某些條件下，細菌受損的細胞膜可能會修復，即使是這種細菌在實驗中也可能被標記為“死”細菌。相反，一些細胞膜完整的細菌可能無法在營養(yǎng)培養(yǎng)基中繁殖，但卻被認定為“活”細菌。結(jié)合幾種不同的生存能力測定方法，如膜滲透性、酶活性和氧化還原電位，可以更全面地評估細菌的生存能力，并消除任何單一生存能力測定方法的固有限制。
對比實驗
以事實為依據(jù)，與進口對比毫不遜色
1. 革蘭氏陰性菌（大腸桿菌為例）活死細菌染色流式檢測結(jié)果對比
圖1：大腸桿菌活死細菌染色流式檢測結(jié)果。大腸桿菌的活菌（未處理）、死菌（70%乙醇處理）懸液按一定比例混合，分別采用本試劑盒和進口品牌試劑盒進行流式檢測。通過綠色熒光或者紅色熒光對側(cè)向散射結(jié)果圖，分別圈出細菌群與標準微球群，然后通過綠色熒光對紅色熒光流式結(jié)果圖展示細菌群的分布?；睢⑺谰臐舛扔嬎憧梢酝ㄟ^綠色或者紅色熒光對側(cè)向散射流式結(jié)果圖、或者綠色熒光對紅色熒光流式結(jié)果圖，根據(jù)實際情況選擇活死菌分群最明顯的結(jié)果圖來進行計算?；睢⑺谰旱姆植嘉恢脮蚣毦N類和參數(shù)設置而存在差別，一些點會分布于劃定區(qū)域以外，也應進行適當?shù)脑u估。結(jié)果顯示美侖活死細菌染色試劑盒檢測效果媲美進口品牌。
2. 革蘭氏陽性菌（乳酸桿菌為例）活死細菌染色流式檢測結(jié)果對比
圖2：乳酸桿菌活死細菌染色流式檢測結(jié)果。乳酸桿菌的活菌（未處理）、死菌（電穿孔處理）懸液按一定比例混合，分別采用本試劑盒和進口品牌試劑盒進行流式檢測。通過綠色熒光或者紅色熒光對側(cè)向散射結(jié)果圖，分別圈出細菌群與標準微球群，然后通過綠色熒光對紅色熒光流式結(jié)果圖展示細菌群的分布?；睢⑺谰臐舛扔嬎憧梢酝ㄟ^綠色或者紅色熒光對側(cè)向散射流式結(jié)果圖、或者綠色熒光對紅色熒光流式結(jié)果圖，根據(jù)實際情況選擇活死菌分群最明顯的結(jié)果圖來進行計算?；睢⑺谰旱姆植嘉恢脮蚣毦N類和參數(shù)設置而存在差別，一些點會分布于劃定區(qū)域以外，也應進行適當?shù)脑u估。結(jié)果顯示美侖活死細菌染色試劑盒檢測效果媲美進口品牌。圖3. 使用美侖CCK-8對細胞狀態(tài)的影響。
操作簡易流程&適用菌種范圍
1. 準備菌懸液
2. 細菌染色
3. 制備單染管進行設備調(diào)節(jié)
4. 流式細胞儀檢測染色后的細菌
5. 計算：菌濃度=(菌群分布區(qū)事件數(shù)×稀釋倍數(shù))/(微球分布區(qū)事件數(shù)×5×10-6)/ ml
本試劑盒適用菌種廣泛，主要包括：蠟樣芽胞桿菌、枯草桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、大腸桿菌、肺炎克雷伯菌、黃體微球菌、草分枝桿菌、銅綠假單胞菌、沙門氏菌、沙雷菌、宋內(nèi)志賀菌、金黃色葡萄球菌和釀膿鏈球菌等。以上菌種通過該試劑盒檢測的計數(shù)結(jié)果均能夠與標準平板計數(shù)結(jié)果表現(xiàn)出良好的相關(guān)性。
其他信息請參考說明書。
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