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重磅產(chǎn)品推薦—Meilunbio 細(xì)胞膜熒光探針系列!??!

Meilunbio 細(xì)胞膜探針系列重磅產(chǎn)品

MB6190 DiD細(xì)胞膜熒光探針紅色

DiD Perchlorate10MG [¥400.00]

MB4239 DiO細(xì)胞膜熒光探針綠色

DiO perchlorate10MG [¥400.00]

MB4240 DiI細(xì)胞膜熒光探針橙紅色 

Dii perchlorate10MG [¥400.00]

MB12482 DiR細(xì)胞膜熒光探針;DiR碘化物

DiR iodide25MG [¥980.00]


DiD, DiI, DiO, DiR家族細(xì)胞膜熒光探針簡(jiǎn)介


染料 DiD, DiI, DiO 和 DiR 是一類親脂性熒光染料家族,用于標(biāo)記細(xì)胞膜等脂溶性生物結(jié)構(gòu)和疏水性組織。這是一類環(huán)境敏感型熒光染料,當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子(例如蛋白質(zhì),雖然在水中其熒光強(qiáng)度很弱)結(jié)合時(shí),其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。它們具有很高的淬滅系數(shù),偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。一旦應(yīng)用于細(xì)胞中,這種染料會(huì)在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴(kuò)散,導(dǎo)致在其最佳濃度條件下,將整個(gè)細(xì)胞膜染色。它們不同的熒光顏色:DiI(橙色熒光)、DiO(綠色熒光)、DiD(紅色熒光)、DiR(深紅色熒光),為活細(xì)胞多色彩熒光成像分析和流式細(xì)胞術(shù)提供了一種便捷的工具。

圖1. 四種細(xì)胞膜熒光探針鑲嵌磷脂雙分子層的發(fā)射波長(zhǎng)


貨號(hào)

品名

熒光顏色

分子量

Ex (nm)

Em (nm)

MB6190

DiD細(xì)胞膜紅色熒光探針

紅色

959.91

644

663

特點(diǎn)

DiD(紅色熒光)可以用來對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行成像和流式分析。DiD可以用633 nm He–Ne 激光器激發(fā),有著比 DiI 更長(zhǎng)的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng),為標(biāo)記具有顯著內(nèi)在熒光的細(xì)胞和組織提供了有價(jià)值的替代方案。

應(yīng)用實(shí)測(cè)

本品配成 5mM 溶液后為深藍(lán)色液體溶液,澄清且無可見異物;

進(jìn)行熒光染色檢測(cè):工作條件:熒光顯微鏡,C6 細(xì)胞,400×,工作濃度  5μM。

結(jié)果:經(jīng)細(xì)胞膜熒光染色,在40倍物鏡下可看到清晰紅色熒光。


MB4239

DiO細(xì)胞膜綠色熒光探針

綠色

881.72

482

500

特點(diǎn)

DiO可以使用標(biāo)準(zhǔn)的FITC濾光器。DiO通常不會(huì)明顯影響細(xì)胞的生存力,因此被廣泛用于正向或逆向的,活的或固定的神經(jīng)等細(xì)胞或組織的示蹤劑或長(zhǎng)期示蹤劑(long-term tracer)。除了最簡(jiǎn)單的細(xì)胞膜熒光標(biāo)記外,還可以用于檢測(cè)細(xì)胞的融合和粘附,檢測(cè)發(fā)育或移植過程中細(xì)胞遷移,通過FRAP檢測(cè)脂在細(xì)胞膜上的擴(kuò)散,檢測(cè)細(xì)胞毒性和標(biāo)記脂蛋白等。

應(yīng)用實(shí)測(cè)


本品配成 5mM 溶液后為黃色液體溶液,澄清且無可見異物;進(jìn)行熒光染色檢測(cè):工作條件:熒光顯微鏡,NIH/3T3 細(xì)胞,400×,工作濃度 5μM。

結(jié)果:經(jīng)細(xì)胞膜熒光染色,在40倍物鏡下可看到清晰綠色熒光。 


MB4240

DiI細(xì)胞膜橙紅色熒光探針

橙紅色

933.88

550

567

特點(diǎn)

DiI 即 DiIC18(3),可以使用標(biāo)準(zhǔn)的TRITC濾光器。DiI比DiO更亮。DiI通常不會(huì)影響細(xì)胞的生存力,因此被廣泛用于正向或逆向的,活的或固定的神經(jīng)等細(xì)胞或組織的示蹤劑或長(zhǎng)期示蹤劑(long-term tracer)。被DiI標(biāo)記的神經(jīng)細(xì)胞在體外培養(yǎng)的條件下可以存活長(zhǎng)達(dá)4周,在體內(nèi)可以長(zhǎng)達(dá)一年。DiI在經(jīng)過固定的神經(jīng)元細(xì)胞膜上的遷移速率為0.2-0.6mm/day,在活的神經(jīng)元細(xì)胞膜上的的遷移速率為6mm/day。DiI除了最簡(jiǎn)單的細(xì)胞膜熒光標(biāo)記外,還可以用于檢測(cè)細(xì)胞的融合和粘附,檢測(cè)發(fā)育或移植過程中細(xì)胞遷移,通過FRAP檢測(cè)脂在細(xì)胞膜上的擴(kuò)散,檢測(cè)細(xì)胞毒性和標(biāo)記脂蛋白等。

應(yīng)用實(shí)測(cè)

本品配成 5mM 溶液后為紫粉色液體溶液,澄清且無可見異物;

進(jìn)行熒光染色檢測(cè):工作條件:熒光顯微鏡,C6 細(xì)胞,400×,工作濃度  5μM。

結(jié)果:經(jīng)細(xì)胞膜熒光染色,在40倍物鏡下可看到清晰橙紅色熒光。


MB12482

DiR細(xì)胞膜熒光探針;DiR碘化物

深紅色

1013.39

748

780

特點(diǎn)

DiR在活體成像或者示蹤中非常有用,因?yàn)槠渌l(fā)射的紅外光可以高效地穿過細(xì)胞和組織,并且在紅外光范圍內(nèi),其本底熒光水平很低。DiR 的兩個(gè)18-碳鏈插入到細(xì)胞膜,從而進(jìn)行特定的、穩(wěn)定的細(xì)胞染色,幾乎不會(huì)發(fā)生細(xì)胞間的染料轉(zhuǎn)移。

應(yīng)用實(shí)測(cè)

用DIR-RGD-NP界定腫瘤相關(guān)血管

(A)  Delineation of tumor vascularity. White light image of tumors showing  the outline of tumor-associated vasculature only when dye was administered in  RGD-coated nanoparticles; (B) Ex vivo imaging and colocalization of mCherry  and DIR signals in dissected tumors (from top: 2mm, 5mm, and 10mm in size).

Source: Novel approach for the detection of intraperitoneal  micrometastasis using an ovarian cancer mouse model by Alvero et al.,  Scientific Reports, Jan. 2017.



操作方法

1. 染色液制備

(1)配置DMSO或EtOH 儲(chǔ)存液:儲(chǔ)存液用 DMSO或EtOH配置濃度1~5 mM。

【注】未使用的儲(chǔ)存液分裝儲(chǔ)存在-20℃,避免反復(fù)凍融。

(2)工作液制備:用合適的緩沖液(如:無血清培養(yǎng)基,HBSS或PBS)稀釋儲(chǔ)存液,配制濃度為1~5 μM的工作液。

【注】工作液最終濃度建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度的10倍范圍內(nèi)開始最優(yōu)濃度的摸索。

2. 懸浮細(xì)胞染色

(1)加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞,使其密度為1×106/mL。

(2)37 ℃孵育細(xì)胞 2~20min,不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以20min作為起始孵育時(shí)間,之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。

(3)孵育結(jié)束,按1000~1500 rpm離心5min。

(4)傾倒上清液,再次緩慢加入37℃預(yù)熱的生長(zhǎng)培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

(5)重復(fù)(3),(4)步驟兩次以上。

3. 貼壁細(xì)胞的染色 

(1)將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。

(2)從培養(yǎng)基中移走蓋玻片,吸走過量培養(yǎng)液,將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

(3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。

(4)37 ℃孵育細(xì)胞 2~20min,不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以20min作為起始孵育時(shí)間,之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。

(5)吸干染料工作液,用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次,每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞,孵育5~10min,然后吸干培養(yǎng)基。

4. 顯微鏡檢測(cè)

DiD,DiO,DiI,DiR選擇合適的濾光器觀察。

5.流式細(xì)胞儀檢測(cè)

經(jīng)DiD,DiO,DiI,DiR染色的細(xì)胞可分別用流式細(xì)胞儀的FL1,F(xiàn)L2,F(xiàn)L3或FL4通道檢測(cè)



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